Banner
Матричный формат ПЦР-РВ

Метод использует двухмерные матрицы открытого типа в каждом узле (микрореакторе) которых (30 или 48) иммобилизованы ПЦР-смеси для определения конкретного объекта, включая праймеры, зонды hot start taq-полимеразу и dNTP, необходимые для проведения ПЦР. В случае работы с РНК-содержащими объектами смеси содержат также обратную транскриптазу для проведения предварительной обратной транскрипции в микрореакторе непосредственно перед стартом ПЦР.

Матрицы выполнены на основе алюминиевых или кремниевых пластин (микрочипов) и предназначены для работы на микрочиповом амплификаторе нуклеиновых кислот в режиме реального времени «АриаДНА®»

Специальная обработка поверхности микрочипов и технология иммобилизации и стабилизации реагентов в микрореакторах обеспечивает сохранность матриц до 6 месяцев при комнатной температуре и снижает количество необходимых в работе манипуляций (необходимо только нанести на матрицу образец ДНК/РНК)

Выпаривание образца предотвращается нанесением слоя герметезирующей жидкости (минерального масла), а сочетание гидрофильного покрытия поверхности микрореактора и гидрофобной поверхности микрочипа препятствует взаимному влиянию и взаимодействию лунок.

Stacks Image 6308

Схема микрочипа (подложки)

Stacks Image 6310

Схема предзаполненной матрицы

Эффективность ПЦР и однородность матрицы, сравнение с традиционным форматом (пробирки) проведения ПЦР в режиме реального времени

Stacks Image 6323

Однородность эффективности ПЦР в микрореакторах матрицы: (a) Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum, Ct = 14.32 ± 0.15, (b) Phytophthora infestans, Ct = 14.89 ± 0.11, (c) PVS, Ct = 13.28 ± 0.05, and (d) PVYO, Ct = 15.97 ± 0.13. IC, Внутренний Контрольный Образец. Концентрация ДНК/РНК в образцах - 1 μg ml−1.

Stacks Image 6325

Микроматричный формат (справа) на амплификаторе AriaDNA® в сравнении с ПЦР в режиме реального времени на Roche LightCycler 480 II (пробирочный формат, 8 пробирок на образец) при определении одних образцов вироида веретеновидности клубней картофеля (PSTVd) и вируса картофеля S (PVS) одинаковыми тест-системами.

Воспроизводимость результатов на предзаполненных матрицах контролируется по стартовому циклу внутреннего контрольного образца. Результаты, полученные на матрицах различных серий, выпущенных на протяжении трёх лет (более 2000 испытаний) показывают, что стандартное отклонение Ct ВКО не выходит за 5%.